Приготовление гистологический препарат из костного мозга трубчатых костей

Изучение костного мозга является важной частью в прогнозировании терапевтического эффекта лечения клеточными
продуктами. При морфологических исследованиях одним из основных методов получения информации является ги-
стологический метод как наиболее известный и точный. Прижизненное получение костного мозга является достаточно
сложным и трудоемким процессом. Мы столкнулись с необходимостью приготовления гистологических препаратов из
костного мозга трубчатых костей и вследствие этого поставили цель: оптимизировать способ получения гистологических
срезов костного мозга трубчатых костей.
Материалы и методы: Костный мозг трубчатой кости (бедренная кость), 10% бесцветный пищевой желатин, 10% нейтраль-
ный формалин, гистологические красители (гематоксилин-эозин), иммуногистохимия: CD34 (кат. 550390, Clone 581, 1:10,
BectonDickinson (США)), Retrievagen A (pH 6.0) (кат. 550524, BectonDickinson (США)), AntibodyDiluentfor IHC (кат. 559148,
BectonDickinson (США)), Anti-MouseIg HRP DetectionKit (кат. 551011, BectonDickinson (США)). 10% желатин довести до
жидкого состояния на слабом огне. Полученный раствор поместить в теплоизоляционную посуду. Костный мозг соединяем
с растворенным желатином в соотношении 1:1. В полученную смесь добавляется 10% формалин в соотношении 1:10 и
осторожно перемешиваем. Таким образом, концентрация формалина в смеси костного мозга и желатина достигает около
0,8-1,0%. Все ставится в холодильник при t 2-40С для застывания на 30-60 мин. Из полученного застывшего материала
нарезались блоки, из которых на замораживающем микротоме получали срезы толщиной 4-6 мкм. Срезы помещались
на предметные стекла, обработанные полилизином (ThermoScientific). Для гистологического исследования производили
окрашивание гематоксилин – эозином. При иммуногистохимическом исследовании срезы обрабатывались Retrievagen A
(pH 6.0) (кат. 550524, BectonDickinson (США)) для демаскировки антигена согласно протоколу производителя. Антитела
CD34 разводилиAntibodyDiluentfor IHC (кат. 559148, BectonDickinson (США)) в соотношении 1:10 и наносили на срезы со-
гласно инструкции производителя. Затем срезы обрабатывали системой визуализации с детекцией ДАБ Anti-MouseIg HRP
DetectionKit (кат. 551011, BectonDickinson (США)), докрашивали гематоксилином и накрывали покровным стеклом. Далее
гистологические препараты визуализировались на оптическом микроскопе Olympus CX 41 (Япония).
Результаты: сокращается время приготовления гистологических блоков и срезов. Сохраняется прижизненная фиксация
состояние клеток и тканей, за счет применения 0,8-1,0% формалина; исключаются более дорогостоящие уплотнители
(парафин, целлоидин, специальный парафин для гистологических исследований, содержащий различные пластические
полимеры) и другие расходные материалы при проводке блоков и срезов; модификация позволяет приготовить не менее
качественные гистологические препараты, получаемы при других методиках. Заключение: данная модификация получения
гистологических срезов костного мозга, имеет ряд преимуществ и может быть использована в научных исследованиях,
а также в гистологической, патогистологической практике и позволит более полно изучить прижизненно костный мозг
трубчатых костей.
Ключевые слова: желатин, формалин, гистологическая и иммуногистохимическая окраска, костный мозг трубчатых костей.